细胞形态异常剖析 Step1-技术前沿-资讯-生物在线

细胞形态异常剖析 Step1

作者:上海逍鹏生物科技有限公司 2021-09-07T11:17 (访问量:8203)

在培养细胞时,我们通常是没有一个完美的参照物去对比每种细胞形态是否正常,只能根据细胞的三种基本形态去辅助判断。但由于培养细胞环境各不相同,很多老师同学也无法判断出自己的细胞形态是否正常,也会影响接下来的实验。

今天我们小编将与大家一起对这个问题进行探讨~

细胞的基本形态

大多数培养的哺乳动物细胞根据其形态可以分为三大类

成纤维细胞(成纤维细胞样)
细胞是双极或多极的,狭长型,贴壁细胞。

图片

上皮细胞
呈多角形,尺寸更为规则,贴附在基质上呈散斑片状生长。

图片

淋巴细胞
呈球形,通常悬浮生长,不贴附在基质表面。


细胞健康气色特征

图片

HEF胎儿包皮成纤维细胞

图片

huh7人肝癌细胞


细胞异常气色特征

图片

病前

图片

病后

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(永生)Raw264.7


细胞形态异常剖析-污染

这个时候大家肯定很想知道是什么原因导致的,一般形态异常首先考虑的就是污染原因。

污染又大致分为以下几点:细菌污染、真菌污染、支原体污染、黑胶虫污染。那么这几种污染是如何区分的呢?

一、细菌污染

特征:

  • * 在显微镜下或成黑色细沙状,或背景有大量黑点
  • * 可能造成细胞增殖缓慢或形态上的改变(多角、多核等),细胞质中产生空泡、细胞不附着

如果确认是细菌污染,细胞娇贵不舍得丢掉的不要担心,我们已经为您准备好了相应对策。


细菌的克星-抗生素

货号

抗生素

作用对象

使用比例

储存条件

03-049-1B

卡那霉素溶液(10mg/ml)

细菌(如G+、G-、支原体)

稀释:1:100

-20ºC

03-035-1B

硫酸庆大霉素溶液(50 mg/ml)

细菌(如G+、G-、支原体)

稀释: 1:1000

AMB室温

03-031-1B

青链双抗

细菌(如G+、G-)

稀释: 1:100

-20ºC

03-031-5B

青链双抗,10浓缩液

细菌(如G+、G-)

稀释: 1:1000

-20ºC

03-032-1B

青链霉素,制霉菌素三抗

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC

03-033-1B

青链霉素,两性霉素B三抗

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC

03-034-1B

青链霉素,新霉素三抗

细菌(如G+、G-)

稀释: 1:100

-20ºC


二、真菌污染

真菌污染时会有类似棉花絮状的漂浮物,念珠菌会呈卵圆状,在细胞周边生长。


早期并不会使得培养基变黄变浑浊,但是在显微镜下可观察到菌丝体。真菌形成的菌丝呈丝状,管状,树枝状,串珠状。

图片

真菌污染至少要三天后才能长出异常瑰丽的花纹图案。


酵母菌等,当其行出芽生殖时可通过一大一小的连体结构识别。

真菌污染整体特征是:

  • * 细胞被污染后,仍可生长,长时间细胞的活力状态会变差
  • * 梅雨季节时的污染率会提高
  • * 呈卵圆状,在细胞周边生长,成团生长为真菌群

希望您的细胞不要也这样“好看”,不然只能留作欣赏用途了,或者可以尝试使用如下方法救治。

货号

抗生素

作用对象

使用比例

储存条件

03-029-1B

两性霉素B(2500 ug/ml)

真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释:1:1000 ~ 1: 10,000

-20ºC

03-030-1C

制霉菌素(10,000 units/ml)

真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释:1:100 to 1:1000

-20ºC

03-032-1B

青链霉素,制霉菌素三抗

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC

03-033-1B

青链霉素,两性霉素B三抗

细菌(如G+、G-)、真菌(如:酵母菌、霉菌)

稀释: 1:100

-20ºC


三、支原体污染
图片
正常细胞
图片
感染细胞
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支原体菌落

支原体广泛存在于人和动物体内,消毒不完全的器具也易带入支原体。污染时细胞培养基可能依然澄清或者呈微黄色,抽提核酸与蛋白时可有高达30~50%为支原体来源,造成结果偏差。那么支原体污染都有哪些明显特征呢?

  • * 革兰氏染色为阴性,0.15-0.3 μm,光学显微镜难以辨识
  • * 明显影响到细胞形态、增殖、基因表达与蛋白合成及代谢反应

也可使用支原体检测试剂盒进行检测:

图片

该试剂盒可检测的14种支原体是:M.fermentans(发酵支原体), M.hyorhinis(猪鼻支原体), M.arginini(精氨酸支原体), M.Orale(口腔支原体), M.Salivarium(唾液支原体), M.hominis(人型支原体), M.pulmonis(肺支原体), M.arthritidis(关节炎支原体), M.bovis(牛支原体), M.pneumoniae(肺炎支原体), M.pirum(梨支原体)and M.capricolum(山羊支原体), as well as Acholeplasma(无胆甾原体)and Spiroplasmaspecies(螺原体)。

图片图片

△电泳图谱电泳结果(图片来源:终端用户仅供参考)

支原体检测试剂盒的特异性:

EZ-PCR支原体检测试剂盒(货号:20-700-20)。

引物与美国国家生物技术中心(NCBI)数据库进行比对,并检测16SrRNA靶区同源性。96种支原体具有相关序列同源性。

图片

支原体杀除试剂

BIOMYC系列
图片

BIOMYC-1 货号:03-036-1B 主要成分:太妙菌素

BIOMYC-2 货号:03-037-1B 主要成分:Minocycline

BIOMYC-3 货号:03-038-1B 主要成分:环丙沙星

支原体杀除方案

方案一

BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)的使用方法:

  • * 加1ml的BIOMYC-1溶液至100 ml培养基中,保持受污染的细胞在混合液中培养4天。期间需加入含BIOMYC-1溶液的少许的新培养基;
  • * 4天后,加1ml BIOMYC-2溶液至100 ml的新培养基中,并维持培养3天;
  • * 以上是一个处理循环阶段,必要时可继续2-3次如上处理循环;
  • * 在处理过程中,细胞需要做支原体污染检测,以确认效果,从而适当减少实验过程。

方案二

BIOMYC-3(03-038)的使用方法:

  • * 加1ml BIOMYC-3至100 ml培养基中;
  • * 持续培养14天,期间每2-3天更换一次培养基;
  • * 14天后,用不含BIOMYC-3的完全培养基继续培养细胞14天后再做支原体检测。

经济考虑,用户选择一种方案即可;最佳方案是,客户先用方案一处理一周期,再用方案二处理一周期。

友情提示:如果使用其中一种方案,不能根除支原体,说明该支原体可能在另一种方案的抑菌谱内;36,37,38三者联合可有效根除实验室80%以上的支原体污染。

四、黑胶虫污染

在细胞复苏或传代时往往会出现黑胶虫污染,并且与细胞呈现此消彼长的现象,但是培养基却并不浑浊。黑胶虫具有细胞毒性,可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。
黑胶虫较明显的污染特征:

  • * 活跃游动
  • * 呈卵圆状,球状,杆状等

目前科学界对黑胶虫的身份并无定论,Dr.Cell目前检测的黑胶虫样本,62%为细菌,38%为支原体。(→详情点击此处查看“黑胶虫通缉令”

黑胶虫杀除试剂
BIOMYC系列
图片

BIOMYC-1 货号:03-036-1B 主要成分:太妙菌素

BIOMYC-2 货号:03-037-1B 主要成分:Minocycline

BIOMYC-3 货号:03-038-1B 主要成分:环丙沙星


抗生素
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三抗 货号:03-033-1B 主要成分:青、链、两性霉素。

黑胶虫杀除方案

黑胶虫杀除方案一

BIOMYC-1(03-036)和BIOMYC-2(03-037)和三抗(03-033)的使用方法:

  • * 加1ml BIOMYC-1和三抗溶液至100 ml培养基中,保持受污染的细胞在混合液中培养4天。期间需加入含BIOMYC-1和三抗溶液的少许的新培养基;
  • * 4天后,加1ml BIOMYC-2和三抗溶液至100 ml的新培养基中,并维持培养3天;
  • * 以上是一个处理循环阶段,必要时可继续2-3次如上处理循环;
  • * 在处理过程中,细胞需要做支原体污染检测,以确认效果,从而适当减少实验过程。

黑胶虫杀除方案二

BIOMYC-3(03-038)和三抗(03-033)的使用方法:

  • * 加1ml BIOMYC-3和三抗溶液至100 ml培养基中;
  • * 持续培养14天,期间每2-3天更换一次培养基;
  • * 14天后,用不含BIOMYC-3和三抗溶液的完全培养基继续培养细胞14天后再做支原体检测。

好啦,今天我们就分享到这里啦~下期我们会接着分享后续细胞形态异常分析的其他方面噢~

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