高效缩短时长，确保质量！Onepot mRNA Transcription工艺全新升级！
近年来，mRNA技术的发展应用持续得到关注。mRNA药物是通过将编码抗原蛋白的mRNA接种到人体，利用人体细胞内的遗传物质进行表达合成抗原蛋白，通过抗原蛋白诱导和激活机体的免疫系统产生免疫反应，从而达到预防和治疗疾病的目的。mRNA药物以安全、高效、周期短等的优势，能够同时诱导产生体液免疫和细胞免疫，目前已经应用在肿瘤、传染病、罕见病、心血管疾病等多种不同适应症。
※图片来源于沙利文
mRNA药物开发的整个流程大致可以分为几步：
序列确定&设计—mRNA体外转录—包封制备
mRNA体外转录（In Vitro Transcription, IVT）步骤：
质粒DNA 提取&线性化—体外转录（共转录加帽）—纯化—mRNA原液
目前现有的工艺大都是质粒DNA在酶切后进行一步纯化，在进行IVT步骤。翌圣生物基于成熟的mRNA 应用开发中心，开发出：“Onepot mRNA Transcription” 工艺，环状质粒DNA在酶切后不进行纯化，直接投料进行体外转录操作，也可以得到高质量的mRNA原液产品。整个工艺在确保产品和工艺质量的前提下，减短了现有工艺的时长。
工艺优势
- 工艺优化，减少IVT步骤，操作更简单；
- 物料成本降低，不需酶切后纯化物料以及质检；
- mRNA质量&得率未降低。
数据展示
“
1、 产量数据
本工艺分别使用了2K 、4K 和9K的片段，进行IVT，1μg的质粒投入，可以产生150-200μg的mRNA，产量倍数高达近200。
*：20ul反应体系下的mRNA产量
“
2、完整度检测
采用CE的方法分别对2K、4K 和9K的片段进行完整度检测，2K和4K的完整度>92%，9K的完整度>87%。
“
3、mRNA加帽率检测
使用LC-MS对2K的序列进行加帽率检测，加帽率为99.5%。
上图：HPLC 紫外色谱图
下图：解卷积分子量图谱
“
4、mRNA加尾率检测
使用LC-MS对样品进行加尾率检测，检测结果显示成正态分布。
上图：液质检测 TIC 图谱
下图： 解卷积分子量图谱
“
5、mRNA细胞活性检测
使用one-pot工艺和普通工艺合成的mRNA产物转染293T细胞24h后，荧光表达无差异。
产品列表
流程定位产品名称货号体外转录
（试剂盒）RNA体外转录Hifair® T7 High Yield RNA Synthesis Kit10623ES一步法mRNA 体外转录T7 High Yield RNA Synthesis Kit for Co-transcription10673ES体外转录
（单组分）限制性内切酶BspQI GMP-grade (10 U/μL)10664ESBsaI GMP-grade (20 U/μL)10661ES10×Digestion buffer 3 GMP-grade10667EST7 RNA 合成酶T7 RNA Polymerase GMP-grade（250 U/μL）10625ES无机焦磷酸酶Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade(1 U/μL)10620ESPyrophosphatase, Inorganic GMP-grade (0.1 U/μL)10672ESRNA 抑制剂Murine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL)10621ES转录buffer10×Transcription Buffer GMP-grade(Mg2+ free)10669ES10× Transcription Buffer 2 GMP-grade10670ESNTPATP Tris Solution GMP-grade (100 mM)10652ESCTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)10653ESUTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)10654ESGTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)10655ESPseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)10656ESN1-Me-Pseudo UTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)10657ESDNA消化模板DNA 消化Deoxyribonuclease I (DNase I) GMP-grade10611ESRNA纯化RNA纯化Hieff NGS® RNA Cleaner12602ESmRNA修饰二步法加帽技术mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade10614ESmRNA Cap 2´-O-Methyltransferase GMP-grade10612ES10× Capping Buffer GMP-grade10666ESMurine RNase inhibitor GMP-grade (40 U/μL)10621ESGTP Tris Solution GMP-grade (100 mM)10655ESS-adenosylmethionine (SAM)（32mM）10619ES共转录帽类似物Cap1-GAG m7(3'OMeG)(5')ppp(5')(2'OMeA)pG (100mM)10677ESCap1-GAG m7G(5’)ppp(5’)(2’OMeA)pG(100 mM)10678ESCap AU-GAUm7G(5')ppp(5')(2'OMeA)pU GMP-grade (100 mM)10679ES加尾酶E.coli poly(A) Polymerase (5 U/μL）14801ESmRNA标准品mRNA原液标准品Firefly Luciferase-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)17101ESeGFP-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)17102ESOVA -mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)17103ESmCherry-mRNA(3-O-Me-GAG, N1-Me-Pseudo UTP)17104ES环状RNA线性RNA 去除RNase R (20U/μL)14606ES