细胞培养过程中出现的沉淀
在细胞培养过程中，我们经常会发现液体中出现了一些杂质积淀。如果排除了污染，细胞培养基中的浑浊通常被解释为金属元素、蛋白和其他培养基组分的沉淀。
沉淀物大多损害细胞正常增殖，因为他们通过螯合吸取培养基养分和其他需要的组分，从而改变培养基的组成。沉淀物可通过显微镜观察，可能会干扰需要成像分析的实验。
那为什么会产生这些沉淀呢？
温度变化
在细胞培养中，温度是引起沉淀的主要因素之一。当所处温度发生极端变化时，从溶液中会析出高分子量血浆蛋白；热失活和冻融循环能促进蛋白降解和沉淀；因为液体或重组成培养基在使用之间保持冷藏储存，盐可能沉淀，尤其是 10x 或其他浓缩的储存液。
失水诱导的浓度改变
如果培养基可能蒸发，培养基组分 (包括盐) 的浓度将会增加，特别是培养基表面可能容易形成晶体沉淀。
钙盐
制备无血清培养基时，组分添加的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀，比如 CaCl2 和 MgSO4 在溶液中反应产生 CaSO4 晶体。高压灭菌和 pH 值不稳定会加剧这一问题。
金属补充物
铜、铁和锌等金属离子是细胞生长所必需的，是无血清培养基的重要补充物。培养系统中其他血清组分的缺失可能导致这些金属沉淀，为细胞形成有毒的环境。在较高 pH 环境下 (一般>8 时)，碳酸盐和氢氧根离子与铜离子、磷酸盐和氢氧根离子与铁离子、碳酸盐、磷酸盐和氢氧根离子与锌离子、氢氧根离子与镁离子易形成不溶性沉淀物；在氧化条件下，铜和锌更易于沉淀。
金属沉淀物及对应颜色
| 金属沉淀物 | 颜色 |
| 硫化亚铜（I） | 黑色 |
| 氧化铜（I） | 黑色 |
| 氧化亚铁（I） | 黑色 |
| 硫化亚铁（II） | 黑色 |
| 氢氧化铜（II） | 蓝色 |
| 磷酸亚铁（II） | 蓝色 |
| 胱氨酸亚铜 | 蓝-灰色 |
| 碳酸铜（II） | 蓝-深绿色 |
| 氯氧化铜（II） | 蓝-绿色 |
| 醋酸铁（III） | 棕色 |
| 碳酸钙 | 无色 |
| 磷化亚铜（I） | 灰-黑色 |
| 氧化镁 | 灰-绿色/棕-黑色 |
| 三氧化二铁（III） | 红-黑色 |
| 氢氧化铁（III） | 红-棕色 |
| 碳酸锰 | 玫瑰色 |
| 磷酸锌 | 灰色 |
| 磷酸钙 | 白色 |
| 磷酸镁 | 白色 |
| 氢氧化镁 | 白色 |
| 过|氧|化|镁 | 白色 |
| 焦磷酸镁 | 白色 |
| 碳酸锌 | 白色 |
| 氧化锌 | 白色 |
| 硫化锌 | 白色 |
| 碳酸亚铜（I） | 黄色 |
| 氢氧化亚铜（I） | 黄色 |
| 过|氧|化|锌 | 黄色 |
污染
培养基浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。
详细情况可回顾上一集内容→《细胞培养常见问题》
常见原因和解决方案
▨ 温度
解决方案：
1. 参考供应商说明书选择最佳的培养基储存和操作方法
2. 避免反复冻融
▨ 钙盐
解决方案：
1. 逐个添加其它培养基组分之前，用去水离子水单独溶解 CaCl2
2. 可添加缓冲液避免渗透压的变化。
▨ 浓度
解决方案：
1. 确保培养瓶/板不经历蒸发，监测孵育箱加湿效果;
2. 密封培养器皿避免脱水。
▨ 金属补充物
解决方案：
1. 铁结合蛋白转铁蛋白的加入可防止铁在培养中沉淀;
2. 可添加缓冲液避免渗透压的变化。
3. 向培养基中补充甘露醇或丙酮酸以结合过氧化氢，尽可能降低氧化应激。