GloResponse™ CRE-luc2P HEK293 Cell Line

萤光素酶报告系统已经广泛应用于细胞信号通路研究，并成为­药物筛选工具。GloResponseTM Luciferase Cell Lines将最优化的萤­光素酶报告系统整合入细胞系。GloResponseTM NFAT-RE-luc2P­HEK293 Cell Line(a-f)和CRE-luc2PHEK293 Cell Line(a-e)可通过萤光素­酶报告基因激活活泼的T细胞通路(NFAT)和cAMP响应通路的核因­子，从而快速方便地研究细胞信号。这些信号通路中(包括GPCR)­的非天然催化剂的活性能在它们被转染诱导后进行研究。­用GloResponse TM Cell Lines进行GPCR检测尤其适应于高通量­的筛选，这些检测通常比其他检测模式能提供更好的反应动力学(诱­导倍数)和更好的质量，可通过高Z`值显示。­GPCR能调控广泛的生物学功能，是药物发现中最重要的靶点­集合之一。根据G蛋白a亚基的不同可把GPCR信号通路分为三类：­Gs,Gi/o和Gq。GloResponseTM CRE-luc2PHEK293 Cell Line可应用­于Gs,Gi/o偶联的GPCR(其信号通过cAMP和CRE传导)的研究并设­定筛选方法。对通过钙离子和NFAT-RE传导的Gq偶联的GPCR，应­该使用GloResponseTM NFAT-RE-luc2P HEK293 Cell Line。­GloResponse TM Cell Lines通过克隆筛选稳定转染pGL-4载体的­HEK293细胞(d)得到，该载体带有目的通路特异应答元件。这些细胞­系整合了pGL-4报告基因载体家族的优势。脱稳定化的luc2P报告基­因用于增强的转录动力学应答。luc2P基因的密码子经过优化，以增­强在哺乳动物细胞中的表达。pGL4质粒的骨架也经过改造，降低本­底表达。结果是，当目的信号通路被激活时，该细胞系就能被诱导­产生高水平的反应。

特点­ 

• 方便：预先构建好的经过优化的含萤光素酶报告基因的细胞系。­ 

• 强效：很宽的检测窗，高水平的诱导效果，低背景表达。­ 

• 快速：脱稳定化的萤光素酶对转录调控的应答增强。

操作手册 

Glo-Response™ CRE-luc2P HEK293 Cell Line Technical Bulletin TB362

GloResponse™ NFAT-RE-luc2P HEK293 Cell Line Technical Bulletin TB363

DRD1部分激动剂的检测和化合能力分类。将一个稳定表达多巴胺受体D1的­GloResponseTM CRE-Luc2P克隆，种植在一块96孔板上，10,000个细胞/孔。每一个­激动剂依次以1:2稀释，重复加入四个孔中，起始量为50mM。细胞和激动剂共同孵育­4小时，收集，并使用Dual-GloTM Luciferase 试剂盒(Cat.# E2920)分析。在GloMax®­96 多孔板发光检测仪(Cat.# E6501)上测量萤光素酶活性。

储存条件: 冷冻的细胞≤-140℃储存(物理深冻或液氮)，使用时解­冻并传代