Hieff Unicon 通用TaqMan多重荧光定量qPCR探针预混液
产品名称： Hieff Unicon 通用TaqMan多重荧光定量qPCR探针预混液
英文名称： Hieff Unicon Universal TaqMan multiplex qPCR master mix
产品编号： 11121ES60
产品价格： 询价
产品产地： 翌圣生物
品牌商标： Yeasen
更新时间： 2025-02-07T09:13:34
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 100T | 729.0 |
- 联系人 : 李自转
- 地址 : 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元
- 邮编 : 200030
- 所在区域 : 上海
- 电话 : 139****5640 点击查看
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- 邮箱 : lizizhuan@yeasen.com
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产品描述
Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus)是含有gDNA去除步骤的cDNA第一链合成试剂盒。该试剂盒基于Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase而开发。该酶热稳定性大幅度提高，可耐受高达50℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时，该酶增强了与模板的亲和力，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升，可扩增长达10 kb的cDNA。
该试剂盒包含gDNA digester，可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染，保证后续结果更加可靠。该试剂盒提供两种cDNA合成引物：Random Primers N6 和oligo (dT)18，用户可根据需要，选择Random Primers N6，Oligo (dT)18或Gene Specific Primers作为逆转录引物，合成的单链cDNA产物可直接用来进行后续PCR或者qPCR反应。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 11121ES60 (100 T) |
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11121-A |
RNase-free H2O |
2×1 mL |
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11121-B |
5×gDNA digester Buffer |
200 μL |
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11121-C |
gDNA digester |
100 μL |
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11121-D |
5×Hifair® Ⅱ Buffer plus |
400 μL |
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11121-E |
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix |
200 μL |
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11121-F |
Oligo (dT)18 (50 μM) |
100 μL |
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11121-G |
Random Primers N6 (50 μM) |
100 μL |
【注】：
1）5×Hifair® Ⅱ Buffer plus包含gDNA digester抑制剂和dNTP。
2）Hifair® Ⅱ Enzyme Mix包含RNase inhibitor。
运输和保存方法
干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。
注意事项
1）反应液的配制应在冰上操作完成，操作过程应避免RNase污染。
2）建议RNA是溶于水而不是TE中，因为TE会干扰gDNA去除以及逆转录反应。
3）可以不经过基因组去除步骤，直接进行逆转录，这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit（Cat#11119）效果一致。但是请勿将gDNA digester与11119ES中的5×Hifair® Ⅱ Buffer配套使用，因其不含终止gDNA去除反应的成分，会影响反转录和后续的qPCR实验。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
5）本产品仅作科研用途！
关于逆转录引物的选择
1） 如果模板为真核生物来源，建议选择Oligo (dT)18 ，与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对，可获得最高产量的全长cDNA。
2）原核生物RNA的反转录请选用Random Primers N6或者基因特异性引物。
3）Random Primers N6适用性较广，适用于mRNA、rRNA、tRNA、small RNA和LncRNA等模板。
4）使用Random primers N6，进行2 kb以下的cDNA合成时，Random primers N6的使用量为 1-2 μL；2 kb 以上的cDNA合成时，Random primers N6 的使用量为0.4-1 μL。
第一链cDNA合成操作步骤
一、若实验需要去除残留基因组DNA
1. 在RNase-free离心管中配制如下混合液，用移液器轻轻吹打混匀。42℃孵育2 min。
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组分 |
使用量 |
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RNase-free H2O |
To 10 μL |
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5× gDNA digester Buffer |
2 μL |
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gDNA digester |
1 μL |
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Total RNA |
1 ng -5 μg* |
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or mRNA |
1 ng-500 ng* |
【注】：* 若后续实验为qPCR，Total RNA投入量为1 ng -1 μg；mRNA的投入量为1 ng-100 ng。若基因的表达丰度很低，最多可投入5 μg Total RNA或500 ng mRNA。
2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
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RNase-free H2O |
To 20 μL |
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上一步的反应液 |
10 μL |
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5× Hifair® Ⅱ Buffer plus |
2 μL* |
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Hifair® Ⅱ Enzyme Mix |
2 μL |
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Random Primers N6 (50 μM) |
1 μL |
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or Oligo (dT)18 (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) |
or 1 μL |
|
or 1 μL |
【注】：
1）逆转录引物：荧光定量实验推荐Random Primers N6与Oligo (dT)18 1:1混合使用。
2）5×Hifair® Ⅱ Buffer plus加入量（*）：因gDNA digester buffer的影响，本体系中只需要加2 μL。
3）建议先加入5×Hifair® Ⅱ Buffer plus混匀后再添加反转录引物，以保证完全抑制gDNA digester的活性。
3. 逆转录程序设置
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温度 |
时间 |
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25℃ |
5 min |
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42℃ |
30 min |
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85℃ |
5 min |
【注】：逆转录温度：推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂模板，可将逆转录温度提高到50℃。
4. 逆转录产物可以-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。
二、若实验无需去除基因组DNA
1. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
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组分 |
使用量 |
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RNase-free H2O |
To 20 μL |
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Total RNA |
1 ng -5 μg |
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or mRNA |
1 ng-500 ng |
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5× Hifair® Ⅱ Buffer plus |
4 μL* |
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Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers N6 (50 μM) |
1 μL |
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Hifair® Ⅱ Enzyme Mix |
2 μL |
【注】：
1）逆转录引物：荧光定量实验推荐Random Primers N6与Oligo (dT)18 1:1混合使用。
2）5×Hifair® Ⅱ Buffer plus加入量（*）：因无gDNA digester buffer的影响，本体系中需要添加4 μL。
【可选步骤】：针对复杂模板，建议RNA、H2O、反转录引物在65℃保温5 min后，冰上迅速冷却。然后再加入反转录酶和Buffer。
2. 逆转录程序设置参照上述基因组去除后的逆转录程序。
HB220607