MolPure® Magnetic Circulating Cell-Free DNA Kit  适用于从0.3-4 mL的血浆、血清样本中的提取游离DNA。本产品采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系，可最大限度的纯化回收游离DNA（每毫升血浆通常为1-100 ng）。提取的核酸产量高，质量稳定可靠，最大限度的去除抑制物，适用于各种下游应用实验，如建库、二代测序、qPCR等。

产品信息

组分信息

储存条件

1）Part I组分室温运输，4 ℃保存，有效期12个月。

2）Part II组分室温运输，室温保存，有效期12个月。

实验前准备

1. 自备设备和试剂：磁性分离架（适用于1.5 mL和15 mL离心管），水浴锅或金属浴，涡旋振荡器，旋转混匀仪，1.5 mL和15 mL离心管，无水乙醇等。

2. 首次使用前，在洗涤液B瓶中加入标签注明体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持瓶中的乙醇含量。

使用说明

A:手动法提取操作步骤

步骤一：样本前处理

1.针对不同样本体积请按下表体积添加各组分：

2.根据样本体积向离心管中加入蛋白酶K和样本，颠倒混匀后加入裂解液，短暂涡旋混匀后，60 ℃孵育20 min，期间需上下颠倒混匀2-3次。

步骤二：游离DNA提取

以15 mL离心管操作为例，从血浆样本中提取游离DNA。

1. 向冷却至室温的离心管中加入结合液和磁珠，短暂涡旋混匀，室温旋转孵育10 min。
2. 转移至磁力架中，静置约5 min观察到磁珠完全吸附在管壁上，小心吸除上清液。
3. 向上述离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s使磁珠彻底分散，将磁珠和洗涤液A全部转移至洁净的1.5 mL离心管中，并保留该15 mL离心管以供步骤4润洗。
4. 将1.5 mL离心管放入磁力架中，静置约1 min，待溶液澄清后，吸取上清液转移至步骤3保留15 mL离心管中进行润洗，并将其全部转移至包含磁珠的1.5 mL离心管中，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
5. 向1.5 mL离心管中加入800 μL洗涤液A，涡旋振荡20 s，瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
6. 向离心管中加入1 mL洗涤液B，涡旋振荡1 min。
7. 瞬时离心后将离心管转移至磁力架，待溶液澄清后小心吸弃上清液。
8. 重复步骤6-7一次。
9. 短暂离心后将离心管放置在磁力架上，小心吸除残余液体。
10. 开盖室温放置2～5 min使乙醇充分挥发，观察到磁珠表面无液体或刚出现龟裂即可。

（注：磁珠不能过度干燥，过度干燥会导致洗脱效率下降。若室温过低可适当延长晾干时间。）

1. 向晾干后的离心管中加入洗脱液，涡旋振荡5 min，短暂离心后将离心管置于磁力架上直至磁珠彻底吸附，收集洗脱液（注意不要吸到磁珠）。
2. 核酸溶液短期保存于-20 ℃，长期保存需放置于-80 ℃。

该产品可搭配自动化提取仪器，如杭州奥盛Auto-Pure32A 自动化核酸提取仪

注意事项

1. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其是裂解液，结合液组分），如有浑浊可40 ℃加热或超声处理使溶液澄清。

2. 磁珠应冷藏保存，避免冻存或反复冻融，以免影响使用效果。

3. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

4. 样本保存时间过长、血浆含有基因组核酸或者样本在室温放置过久均会导致目标核酸得率降低。为了保证提取得率，样本可以是新鲜、冷冻状态下未经冻融或者在cf DNA保存管中有效保存的血浆和血清。血浆的分离与储存建议见附录1。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

6. 本产品仅作科研用途。

Ver. CN20230705