产品简介

本品是基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb。本产品配备了优化缓冲液，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品规格 

组分信息

产品储存

-25~-15℃储存，有效期1年。

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。

操作注意

1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅作科研用途！

操作说明

1. 推荐PCR反应体系

表1  PCR反应体系

【注】：使用前请务必将其彻底混匀。

1) 试剂使用：使用前要充分解冻混匀。

2) Mg2+终浓度：体系终浓度为2 mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

3) 高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

4) 不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：

表2  不同模板的推荐使用量

2. PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

两步法程序（优先推荐）：                                                   三步法程序（常规程序）：

【注】：

1. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。

2. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:                                                                                 *不同扩增程序下的特点：